ЭКСПРЕССИЯ АКТИВНОЙ ФОРМЫ КАСПАЗЫ-3 НЕ ЯВЛЯЕТСЯ ДОСТОВЕРНЫМ ПОКАЗАТЕЛЕМ ИНДУКЦИИ АПОПТОЗА В СТИМУЛИРОВАННЫХ CD4+ Т-ЛИМФОЦИТАХ

Авторы

  • Евгения Владимировна Сайдакова ФГБОУВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» http://orcid.org/0000-0002-4342-5362
  • Виолетта Викторовна Власова ФГБОУВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» http://orcid.org/0000-0002-1656-7277

Ключевые слова:

CD4 Т-лимфоциты, апоптоз, каспаза-3, проницаемость цитоплазматической мембраны, асимметрия цитоплазматической мембраны, активация, проточная цитометрия

Аннотация

Цель настоящей работы – анализ экспрессии активной формы каспазы-3 в стимулированных CD4+ Т-лимфоцитах и сопоставление ее с другими широко используемыми маркерами апоптоза и активности CD4+ Т-клеток. В процессе исследований мононуклеарные клетки периферической крови человека стимулировали анти-CD3/анти-CD28 антителами в течение 48 ч. и определяли экспрессию активной формы каспазы-3, маркеров активации (CD25), пролиферации (Ki-67) и апоптоза (PO-PRO/PI и AnnexinV/PI) методом проточной цитометрии. Было установлено, что под влиянием стимулятора доля каспаза-3-позитивных лимфоцитов среди CD4+CD45RA– Т-клеток увеличилась в 5.7 раз (P < 0.001), что не сопровождалось ростом процентного содержания умирающих клеток, определенных с использованием других маркеров апоптоза (P > 0.05). Относительное количество клеток, экспрессирующих активную форму каспазы-3, было связано с параметрами активации (R = 0.878; P < 0.001) и пролиферации (R = 0.917; P < 0.001), но не программируемой гибели CD4+ Т-лимфоцитов (P > 0.05). Исходя из полученных данных можно заключить, что использование активной формы каспазы-3 в качестве единственного маркера при исследовании апоптоза стимулированных CD4+ Т-лимфоцитов приводит к ложноположительным результатам, во многом отражающим активацию клеток. Для получения достоверных данных требуется введение дополнительных параметров, учитывающих как индукцию программируемой клеточной гибели, так и активность лимфоцитов.

Биографии авторов

Евгения Владимировна Сайдакова, ФГБОУВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»

Кандидат биологических наук, доцент кафедры микробиологии и иммунологии

Виолетта Викторовна Власова, ФГБОУВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»

Магистрант биологического факультета

Библиографические ссылки

Akbar A.N. et al. Loss of CD45R and gain of UCHL1 reactivity is a feature of primed T cells // J. Immunol. 1988. Vol. 140. P. 2171–2178.

Alam A. et al. Early activation of caspases during T lymphocyte stimulation results in selective substrate cleavage in nonapoptotic cells // J. Exp. Med. 1999. Vol. 190. P. 1879–1890.

Alnemri E.S. Mammalian cell death proteases: a family of highly conserved aspartate specific cysteine proteases // J. Cell Biochem. 1997. Vol. 64. P. 33–42.

Belloc F. et al. Flow cytometry detection of caspase 3 activation in preapoptotic leukemic cells // Cytometry. 2000. Vol. 40. P. 151–160.

Brancolini C. et al. Dismantling cell-cell contacts during apoptosis is coupled to a caspase-dependent proteolytic cleavage of beta-catenin // J. Cell Biol. 1997. Vol. 139. P. 759–771.

Carracedo J. et al. Caspase-3-dependent pathway mediates apoptosis of human mononuclear cells induced by cellulosic haemodialysis membranes // Nephrol. Dial. Transplant. 2002. Vol. 17. P. 1971–1977.

Carson D.A., Ribeiro J.M. Apoptosis and disease // The Lancet. 1993. Vol. 341. P. 1251–1254.

Fan J. et al. Circulating Peptidome and Tumor-Resident Proteolysis // Enzymes. 2017. Vol. 42. P. 1–25.

Fernando P. et al. Caspase 3 activity is required for skeletal muscle differentiation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. Vol. 99. P. 11025–11030.

Janicke R.U. et al. Caspase-3 is required for DNA fragmentation and morphological changes associated with apoptosis // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273. P. 9357–9360.

Kennedy N.J. et al. Caspase activation is required for T cell proliferation // J. Exp. Med. 1999. Vol. 190. P. 1891–1896.

Kook S. et al. Caspase-dependent cleavage of tensin induces disruption of actin cytoskeleton during apoptosis // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2003. Vol. 303. P. 37–45.

Lamkanfi M. et al. Caspases in cell survival, proliferation and differentiation // Cell Death. Differ. 2007. Vol. 14. P. 44–55.

Lowe S.W., Lin A.W. Apoptosis in cancer // Carcinogenesis. 2000. Vol. 21. P. 485–495.

O'Reilly L.A., Strasser A. Apoptosis and autoimmune disease // Inflamm. Res. 1999. Vol. 48. P. 5–21.

Santos N.F.G.D. et al. Active caspase-3 expression levels as bioindicator of individual radiosensitivity // An. Acad. Bras. Cienc. 2017. Vol. 89. P. 649–659.

Vaux D.L., Strasser A. The molecular biology of apoptosis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. Vol. 93. P. 2239–2244.

Wilhelm S., Wagner H., Hacker G. Activation of caspase-3-like enzymes in non-apoptotic T cells // Eur. J. Immunol. 1998. Vol. 28. P. 891–900.

Woo M. et al. Caspase-3 regulates cell cycle in B cells: a consequence of substrate specificity // Nat. Im-munol. 2003. Vol. 4. P. 1016–1022.

Загрузки

Опубликован

2019-12-04

Как цитировать

Сайдакова, Е. В., & Власова, В. В. (2019). ЭКСПРЕССИЯ АКТИВНОЙ ФОРМЫ КАСПАЗЫ-3 НЕ ЯВЛЯЕТСЯ ДОСТОВЕРНЫМ ПОКАЗАТЕЛЕМ ИНДУКЦИИ АПОПТОЗА В СТИМУЛИРОВАННЫХ CD4+ Т-ЛИМФОЦИТАХ. Вестник Пермского университета. Серия «Биология»=Bulletin of Perm University. Biology, (3), 353–358. извлечено от http://press.psu.ru/index.php/bio/article/view/2818